Organik maddelerden fosfat grubu koparılmasına ise defosforilasyon denir. ATP'den bir fosfat grubu koparılarak ADP elde edilmesi defosforilasyona örnektir. I. Substrat düzeyinde fosforilasyon (SDF): Enzim aracılığı ile fosfat grubu içeren bir substrattan fosfatın ADP'ye aktarılması ile yapılan ATP sentezidir.